聚焦结核利福平耐药：Xpert和靶向二代测序优势互补

  （通讯员：何梦麒） 利福平通过特异性结合结核分枝杆菌RNA多聚酶β亚基（rpoB基因编码），阻断菌体mRNA合成、抑制蛋白质表达，从而发挥杀菌作用。结核分枝杆菌利福平耐药主要源于rpoB基因突变，突变热点集中在426-452密码子的81bp区域，即利福平耐药决定区（RRDR）。

Xpert MTB/RIF基于荧光定量PCR探针杂交原理，针对rpoB基因RRDR核心区常见突变位点设计特异性探针。野生型序列可正常结合探针并产生荧光信号，判读为利福平敏感；当 RRDR区域发生突变时，探针结合受阻、荧光信号异常，以△Ct＞3.5作为利福平耐药的判读标准。但该技术仅覆盖RRDR有限突变位点，无法识别区外突变及少见新型变异，存在固有检测局限。

二代靶向测序基本原理为边合成边测序，结核/非结核分枝杆菌鉴定及耐药靶向基因测序属于其中的一种，通过多重PCR富集核酸片段，经建库、高通量测序及生物信息学比对，可完整读取基因片段，实现耐药位点全覆盖检测。以临床常见的S450L耐药突变为例，rpoB基因第1349位胞嘧啶（C）突变为胸腺嘧啶（T）碱基替换，使第450位密码子编码的丝氨酸（Ser，S）突变为亮氨酸（Leu，L），改变RNA聚合酶空间构象，降低利福平结合能力，最终导致菌株耐药。

Xpert与二代靶向测序临床定位不同、互为补充。Xpert 操作简便、检测快速，适用于临床样本的快速初筛，但无法检出V170F、I491F等RRDR区外耐药突变，对P439L等沉默突变易出现假敏感结果，且无法区分高低耐药菌株与敏感菌混合感染。依据WHO耐药位点分级标准，二代测序可检出与耐药相关位点及V170F、I491F、P439L等暂定耐药位点，弥补Xpert 的技术短板，适用于疑难隐匿性耐药病例的精准分型。

临床工作中，Xpert用于快速初筛，二代测序用于疑难病例的全覆盖基因分析，二者联合可显著提升分子水平耐药检出效能。需注意，Xpert与二代测序均为基因水平间接耐药推断，表型药敏试验仍是结核分枝杆菌耐药判定的公认金标准，可对分子检测结果进行最终复核与确诊。

一审：王    莹

二审：欧    松

三审：刘志敏